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酶免疫技术特点方法原理,菁选2篇【优秀范文】
2025-08-23人已围观
酶免疫技术特点方法原理,菁选2篇【优秀范文】
酶免疫技术的特点方法原理1 (1)酶和酶作用的底物： ①辣根过氧化酶(HRP)：是一种糖蛋白，含糖量约18%;分子量为44kD;是一种复合酶，由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成的一种卟下面是小编为大家整理的酶免疫技术特点方法原理,菁选2篇【优秀范文】,供大家参考。
酶免疫技术的特点方法原理1
(1)酶和酶作用的底物：
①辣根过氧化酶(HRP)：是一种糖蛋白，含糖量约18%;分子量为44kD;是一种复合酶，由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白，在275nm波长处有最高吸收峰;辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰。在反应中H2O2是受氢体底物，DH2无色的供氢体底物，在HRP的催化下脱氢而显色，此即HRP作为示踪物的原理。
②碱性磷酸酶(AP)：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。从大肠杆菌提取的最适pH为8.0;用小牛肠粘膜提取的AP最适pH为9.6。
③其他的酶：有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。
(2)酶标记的抗体或抗原：
称为结合物。制备方法通常有戊二醛交联法(包括有一步法和二步法)和过碘酸盐氧化法。标记抗体的最佳用量：通常采用棋盘滴定法进行滴定。
(3)固相载体：
主要试剂：固相的.抗原或抗体、医学`教育网搜集整理酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。可作固相载体物质最常用的是聚苯乙烯。与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。聚苯乙烯作为ELISA固相载体，载体还包括微孔滤膜和含铁磁性微粒。聚氯乙烯板的特点为质软板薄，可切割，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有时也略高。
(4)免疫吸附剂：
固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将抗原或抗体固相化的过程称为包被。如在包被后再用1%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除这种干扰。这一过程称为封闭。包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。
酶免疫技术的特点方法原理2
ACA(抗心磷脂抗体)主要通过抑制血管内皮细胞合成PGI2，干扰血栓调节素、纤溶酶原激活剂和蛋白质C系统的活性，抑制抗凝血酶III的活化等而致凝血前高凝状态，与复发性动静脉血栓形成、反复自然流产及血小板减少症关系密切。
其主要程序为用纯心磷脂的无水乙醇溶液包被聚苯乙烯板，封闭后分别于标本孔和对照孔中加入一定稀释度的被检血清及阳性与阴性对照血清，之后加入酶标二抗和酶底物，终止反应后肉眼观察结果或测吸光度(A)值。
具体步骤如下：
预步骤：先用一定浓度的心磷脂溶液包被聚苯乙烯板的小孔，4℃冰箱过夜，次日取出甩尽液体备用。
(1) 用微量移液器分别加待检血清、阳性对照、阴性对照各100μl于1、2、3孔中，370C水浴箱温育30min。
(2) 用PBS液洗板3次，每次3min，甩干。
(3) 每孔加入酶结合物2滴，370C水浴箱温育30min。
(4) 用PBS液洗板3次，每次3min，甩干
(5) 每孔分别加入显色A液、B液各1滴，混匀。370C水浴箱温育5-10min。
(6) 取出肉眼观察结果。如待检血清溶液与阳性对照一致均为蓝色，表明待检血清为ACA+血清。
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原理
方法
酶免疫技术特点方法原理
菁选2篇
酶免疫技术的特点方法原理1
酶免疫技术的基本原理
酶免疫技术有哪些特点
酶免疫技术常用的方法有
酶免疫技术的特点方法原理1 (1)酶和酶作用的底物： ①辣根过氧化酶(HRP)：是一种糖蛋白，含糖量约18%;分子量为44kD;是一种复合酶，由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成的一种卟下面是小编为大家整理的酶免疫技术特点方法原理,菁选2篇【优秀范文】,供大家参考。
酶免疫技术的特点方法原理1
(1)酶和酶作用的底物：
①辣根过氧化酶(HRP)：是一种糖蛋白，含糖量约18%;分子量为44kD;是一种复合酶，由主酶(酶蛋白)和辅基(亚铁血红素)结合而成的一种卟啉蛋白质。主酶为无色糖蛋白，在275nm波长处有最高吸收峰;辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有最高吸收峰。在反应中H2O2是受氢体底物，DH2无色的供氢体底物，在HRP的催化下脱氢而显色，此即HRP作为示踪物的原理。
②碱性磷酸酶(AP)：是从牛肠粘膜或大肠杆菌中提取。从大肠杆菌提取的最适pH为8.0;用小牛肠粘膜提取的AP最适pH为9.6。
③其他的酶：有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。
(2)酶标记的抗体或抗原：
称为结合物。制备方法通常有戊二醛交联法(包括有一步法和二步法)和过碘酸盐氧化法。标记抗体的最佳用量：通常采用棋盘滴定法进行滴定。
(3)固相载体：
主要试剂：固相的.抗原或抗体、医学`教育网搜集整理酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。可作固相载体物质最常用的是聚苯乙烯。与聚苯乙烯类似的塑料为聚氯乙烯。聚苯乙烯作为ELISA固相载体，载体还包括微孔滤膜和含铁磁性微粒。聚氯乙烯板的特点为质软板薄，可切割，价廉、但光洁度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有时也略高。
(4)免疫吸附剂：
固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。将抗原或抗体固相化的过程称为包被。如在包被后再用1%～5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除这种干扰。这一过程称为封闭。包被好的ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。
酶免疫技术的特点方法原理2
ACA(抗心磷脂抗体)主要通过抑制血管内皮细胞合成PGI2，干扰血栓调节素、纤溶酶原激活剂和蛋白质C系统的活性，抑制抗凝血酶III的活化等而致凝血前高凝状态，与复发性动静脉血栓形成、反复自然流产及血小板减少症关系密切。
其主要程序为用纯心磷脂的无水乙醇溶液包被聚苯乙烯板，封闭后分别于标本孔和对照孔中加入一定稀释度的被检血清及阳性与阴性对照血清，之后加入酶标二抗和酶底物，终止反应后肉眼观察结果或测吸光度(A)值。
具体步骤如下：
预步骤：先用一定浓度的心磷脂溶液包被聚苯乙烯板的小孔，4℃冰箱过夜，次日取出甩尽液体备用。
(1) 用微量移液器分别加待检血清、阳性对照、阴性对照各100μl于1、2、3孔中，370C水浴箱温育30min。
(2) 用PBS液洗板3次，每次3min，甩干。
(3) 每孔加入酶结合物2滴，370C水浴箱温育30min。
(4) 用PBS液洗板3次，每次3min，甩干
(5) 每孔分别加入显色A液、B液各1滴，混匀。370C水浴箱温育5-10min。
(6) 取出肉眼观察结果。如待检血清溶液与阳性对照一致均为蓝色，表明待检血清为ACA+血清。
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